Häzirki wagtda brauzeriňizde Javascript öçürilen. Bu web sahypasynyň käbir aýratynlyklary Javascript öçürilende işlemez.
Öz maglumatlaryňyzy we gyzyklanýan dermanyňyzy ýazyň, biz siziň beren maglumatyňyzy giň maglumatlar bazamyzdaky makalalar bilen deňeşdireris we derrew PDF nusgasyny size e-poçta arkaly ibereris.
Ban-Lan-Gen granulalary içege mikrobiotasyny modulirlemek we içege SCFA Derived-GLP-1 önümçiligini dikeltmek arkaly siçanlarda dekstran natriý sulfat sebäpli dowamly gaýtalanýan koliti peseldýär.
Jiao Peng,1-3,*Li Xi,4,*Zheng Lin,3,5 Duan Lifang,1 Gao Zhengsýan,2,5 Diehu,1 Li Jie,6 Li Sýaofeng,6 Şen Sýanchun,5 Sýao Haýtao21Pekin uniwersitetiniň Şençžen hassahanasynyň dermanhana bölümi, Şençžen, Hytaý Halk Respublikasy; 2Şençžen uniwersitetiniň Saglyk ylymlary merkeziniň dermanhana mekdebi, Şençžen, Hytaý Halk Respublikasy; 3Guýçžou lukmançylyk uniwersitetiniň etniki lukmançylyk we däp bolan hytaý lukmançylygyny ösdürmek we ulanmak boýunça inženerçilik tehnologiýalary ylmy-barlag merkezi Bilim ministrliginiň Guýçžu welaýat dermanhana esasy laboratoriýasy, Guýçžu lukmançylyk uniwersitetiniň, Guýýan, Hytaý Halk Respublikasy; 4Gastroenterologiýa bölümi, Pekin uniwersitetiniň Şençžen hassahanasy, Şençžen, Hytaý Halk Respublikasy; 5Guýçžu lukmançylyk uniwersitetiniň dermanhana mekdebi, derman ösümlikleriniň funksiýasy we ulanylyşy boýunça döwlet esasy laboratoriýasy, Guýýan; 6 Laboratoriýa lukmançylyk bölümi, Pekin uniwersitetiniň Şençžen hassahanasy, Şençžen, Hytaý [email protected] Şen Sýançun, Dermanhana mekdebi, Guýçžou lukmançylyk uniwersitetiniň dermanhana mekdebi, Guýçžou, Hytaý Halk Respublikasy, 550004, E-poçta [email protected] Maksat: GLP-1 esasyndaky terapiýa içege keseliniň çişmegi üçin täze bejeriş usulydyr. Ban-Lan-Gen (BLG) granulalary dürli çişmegi bejermekde mümkin bolan çişmegi garşy işjeňligi görkezýän belli wirusa garşy TCM formulasydyr. Şeýle-de bolsa, onuň kolite garşy çişmegi garşy täsiri we täsir mehanizmi henizem belli däl. USULLAR: Syçanlarda dekstran natriý sulfaty (DSS) sebäpli dowamly gaýtalanýan kolit döretmek. BLG-niň gorag täsirini bahalandyrmak üçin kesel işjeňliginiň görkezijileri, şikeslenmäniň gistologiki markerleri we çişmegi garşy sitokin derejeleri geçirildi. BLG-niň içege mikrobiotasyna we içege täsiri syworotka GLP-1 derejeleri we ýogyn içege Gcg, GPR41 we GRP43 ekspresiýasy, içege mikrobiotasynyň düzümi, fekal SCFA derejeleri we ilkinji syçandan GLP-1-iň bölünip çykmagy bilen häsiýetlendirildi. Ýogyn içege epitelial öýjükleri SCFA-dan alynýan GLP-1 önümçiligini. Netijeler: BLG bejergisi beden agramynyň ýitmegini, DAI-ni, ýogyn içege gysgalmagyny, ýogyn içege dokumalarynyň zeperlenmegini we ýogyn içege dokumalarynda TNF-α, IL-1β we IL-6-nyň proiltihaply sitokin derejelerini ep-esli azaldýar. Mundan başga-da, BLG bejergisi kolit syçanlarynda ýogyn içege Gcg, GPR41 we GRP43 ekspresiýasyny we gan serumyndaky GLP-1 derejelerini ep-esli dikeldip biler, şeýle hem Akkermansia we Prevotellaceae_UCG-001 ýaly SCFA öndürýän bakteriýalary artdyrmak we Eubacterium_xylanophilum_group, Ruminococcaceae_UCG-014, Intestinimonas we Oscillibacter ýaly bakteriýalaryň mukdaryny azaltmak arkaly. Mundan başga-da, BLG bejergisi kolit syçanlarynyň tezegindäki SCFA derejesini ep-esli ýokarlandyryp biler. Şol bir wagtyň özünde, in vitro tejribeler BLG bilen bejerilen syçanlaryň tezeginiň ekstraktynyň GLP-1-i bölüp çykarýan kiçi syçan ýogyn içege epitelial öýjükleriniň esasy kiçijiklerini ep-esli höweslendirip biljekdigini hem görkezdi. Netijeler: Bu netijeler BLG-niň kolit garşy täsiriniň bardygyny görkezýär. BLG-niň terapiýa hökmünde ösdürilip bilinmegi mümkin, iň bolmanda bölekleýin içege mikrobiotasyny modulirlemek we içege SCFA-dan alynýan GLP-1 önümçiligini dikeltmek arkaly. Dowamly gaýtalanýan kolit üçin geljegi uly dermanlar. Açarsözler: kolit, Ban-Lan-Gen granulalary, içege mikrobiotasy, gysga zynjyrly ýag kislotalary, GLP-1.
Ýaraly kolit (ÝK) ýogyn içegäniň we göni içegäniň uzak möhletli iltihaplanma keseli bolup, gaýtalanýan içgeçme, garyn agyry, agramyň ýitmegi we mukopurulent ganly içgeçme bilen häsiýetlendirilýär.1 Soňky döwürde Günbatar durmuş ýörelgeleriniň meşhurlygynyň artmagy bilen, Hytaý ýaly öňler pes ýaýran ýurtlarda ÝK-nyň ýaýramagy artýar.2 Bu artma jemgyýetçilik saglygy üçin uly kynçylyklary döredýär we hassalaryň iş ukybyna we ýaşaýyş hiline çynlakaý täsir edýär. Belli bir zat, ÝK-nyň patogenezi köp babatda düşnüksiz bolmagynda galýar, ýöne genetikanyň, daşky gurşaw faktorlarynyň, içege mikrobiotasynyň we immun ulgamynyň ÝK-nyň ösmegine goşant goşýandygy umumy kabul edilýär.3 Häzir hem ÝK-nyň bejergisi ýok we bejerginiň maksady kliniki taýdan kliniki alamatlary gözegçilikde saklamak, remissiýany döretmek we saklamak, nemli bardanyň sagalmagyny höweslendirmek we gaýtalanmagy azaltmakdyr. Klassiki bejergilere aminosalisilatlar, kortikosteroidler, immunosupressantlar we biologiki serişdeler girýär. Şeýle-de bolsa, bu dermanlar dürli täsirleri sebäpli islenýän täsiri gazanyp bilmeýär.4 Soňky döwürde köp sanly barlaglar däp bolan hytaý lukmançylygynyň (TCM) uly mümkinçilikleri görkezendigini görkezdi. pes toksiklik bilen UC-ni aýyrmaga kömek edýär, bu bolsa täze TCM terapiýalarynyň işlenip düzülmeginiň UC.5-7 üçin geljegi uly bejeriş strategiýasydygyny görkezýär.
Banlangen Granulalary (BLG) Banlangen köküniň suw ekstraktyndan ýasalan däp bolan hytaý lukmançylygynyň preparatydyr.8 Wirusa garşy täsirinden başga-da, BLG dürli çişme ýagdaýlaryny bejermekde mümkin bolan çişme garşy işjeňligi görkezýär.9,10 Mundan başga-da, glýukozinolatlar (R, S-gotrin, progotrin, epiprorubin we glýukozid Radix isatidis-iň suw ekstraktlaryndan) we nukleozidlerden (gipoksantin, adenozin, uridin we guanozin) we indigo we indirubin ýaly indigo alkaloidleri bölünip alyndy we anyklandy.11,12 Öňki barlaglar adenozin, uridin we indirubin birleşmeleriniň kolidiň dürli haýwan modellerinde güýçli antikolit täsirini görkezýändigini gowy subut etdi.13-17 Şeýle-de bolsa, BLG-niň kolitde netijeliligini bahalandyrmak üçin subutnama esaslanýan barlaglar geçirilmedi. Häzirki barlagda biz C57BL/6 syçanlarynda dekstran natriý sulfat (DSS) sebäpli dowamly gaýtalanýan kolite BLG-niň gorag täsirini öwrendik we tapdyk. BLG-niň agyz arkaly kabul edilmegi syçanlarda DSS sebäpli dowamly gaýtalanýan ýogyn içege iltihabyny ep-esli gowşatdy, onuň düzgünleşdiriji mehanizmleri içege mikrobiotasynyň modulýasiýasy we içegeden alynýan glýukagon ýaly peptid-1 (GLP-1) önümçiliginiň dikeldilmegi bilen baglanyşyklydyr.
BLG granulalary (şekersiz, NMPA tarapyndan tassyklanan Z11020357; Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd., Pekin, Hytaý; partiýa belgisi: 20110966) dermanhanalardan satyn alyndy. DSS (Molekulýar agramy: 36,000–50,000 Dalton) MP Biologicals (Santa Ana, ABŞ) kompaniýasyndan satyn alyndy. Sulfasalazin (SASP) (≥ 98% arassalyk), gematoksilin we eozin Sigma-Aldrich (Sent-Luis, MO, ABŞ) kompaniýasyndan satyn alyndy. Syçan TNF-α, IL-1β we IL-6 luminex Elisa synag toplumlary ylmy-barlag we işläp düzmek ulgamlaryndan (Minneapolis, MN, ABŞ) satyn alyndy. Sirke turşusy, propion turşusy we ýag turşusy Aladdin Industries (Şanhaý, Hytaý) kompaniýasyndan satyn alyndy. 2-Etilbutir turşusy Merck KGaA (Darmştadt, Germaniýa) kompaniýasyndan satyn alyndy.
6-8 hepdelik erkek C57BL/6 syçanlary (bedeniň agramy 18-22 g) Beijing Wetahe Laboratory Animal Technology Co., Ltd.-den (Pekin, Hytaý) satyn alyndy we 12 sagat ýagtylyk/garaňkylyk sikli bilen 22 ± 2 °C gurşawda saklandy. Syçanlara täze gurşawa öwrenişmek üçin bir hepdelap agyz suwuna erkin elýeterliligi bolan standart kemirgen iýmiti berildi. Soňra syçanlara tötänleýin dört topar bölündi: gözegçilik topary, DSS model topary, SASP bilen bejerilen topar (200 mg/kg, agyz arkaly) we BLG bilen bejerilen topar (1 g/kg, agyz arkaly). 1A suratda görkezilişi ýaly, öňki gözlegimize görä, öňki gözlegimize görä, eksperimental dowamly gaýtalanýan kolit syçanlarda 5 günläp 1,8% DSS-iň üç sikli arkaly, soňra 7 günläp distilled suw arkaly induksiýa edildi. SASP we BLG bilen bejerilen toparlardaky 18 syçan 0-njy günden başlap her gün degişlilikde SASP we BLG bilen bejerildi. Ilkinji tejribelere görä, BLG-niň dozasy 1 g/kg hökmünde kesgitlenildi. Şol bir wagtyň özünde, edebiýata laýyklykda SASP-niň dozasy 200 mg/kg hökmünde kesgitlenildi.4 Gözegçilik we DSS model toparlary synagyň dowamynda deň möçberde suw aldylar.
1-nji surat BLG syçanlarda DSS sebäpli dowamly gaýtalanýan koliti gowulandyrýar.(A) Dowamly gaýtalanýan kolidiň we bejerginiň eksperimental dizaýny, (B) beden agramynyň üýtgemegi, (C) kesel işjeňliginiň indeksi (DAI) bal, (D) ýogyn içegäniň uzynlygy, (E) ýogyn içegäniň wekilçilikli suraty, (F) Ýogyn içegäniň H&E boýagy (ulaltma, ×100) we (G) gistologik bal. Maglumatlar ortaça ± SEM (n = 6) hökmünde görkezilýär.##p < 0.01 ýa-da ###p < 0.001 gözegçilik (Con) toparyna garşy; *p < 0.05 ýa-da **p < 0.01 ýa-da ***p < 0.001 DSS toparyna garşy.
Bedeniň agramy, içegeleriň konsistensiýasy we rektal gan akmasy her gün hasaba alyndy. Kesel işjeňliginiň indeksi (KAK) öň beýan edilişi ýaly beden agramynyň, içegeleriň konsistensiýasy we rektal gan akmasynyň ballaryny birleşdirip kesgitlenildi.19 Tejribäniň ahyrynda ähli syçanlaryň ewtanaziýa edilmegi we goşmaça tejribeler üçin gan, içegeleriň we ýogyn içegeleriň gan akmasy ýygnaldy.
Ýogyn içege dokumasy formalin bilen berkidildi we parafine goýuldy. 5 mikron kesikler ýasaldy we gematoksilin-eozin (H&E) bilen boýaldy, soňra öň beýan edilişi ýaly kör edildi we bal berildi.19
Ýogyn içege dokumasynyň umumy RNK-sy Trizol reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA) arkaly çykaryldy, soňra bolsa ters transkriptaza bilen kDNK-ny çykarmak (TaKaRa, Kusatsu, Shiga, Ýaponiýa) geçirildi. Mukdar taýdan PZR SYBR Green Master (Roche, Basel, Şweýsariýa) bilen real wagt PZR ulgamy arkaly geçirildi. Maksatly gen transkriptleri β-aktine kadalaşdyryldy we maglumatlar 2-ΔΔCT usuly arkaly seljerildi. Gen praýmerleriniň yzygiderliligi 1-nji tablisada görkezilen.
Syçanlaryň ýogyn içegesiniň ilkinji öýjüklerini bölüp almak we ösdürmek öň beýan edilişi ýaly ýerine ýetirildi.20 Gysgaça aýdylanda, 6-8 hepdelik syçanlaryň ýogyn içegeleri ilki boýun çykaryş arkaly gurban edilenden soň kesildi, soňra uzynlyk boýunça açyldy, Hanks deňagramly duz ergini (HBSS, kalsiý we magniýsiz) bilen işlenildi we 0,5-1 mm kiçi böleklere bölündi. Soňra dokumalar erkin DMEM gurşawynda 0,4 mg/ml kollagenaza XI (Sigma, Poole, Beýik Britaniýa) bilen siňdirildi we otag temperaturasynda 5 minutlap 300 xg-da sentrifuga edildi. Pelleti DMEM gurşawynda (10% fetal sygyr syworoty, 100 birlik/ml penisillin we 100 µg/ml streptomisin bilen goşulan) 37 °C-da gaýtadan eridiň we neýlon tordan (gözenekleriň ululygy ~250 µm) geçirildi. Ýogyn içegesiniň epitelial öýjükleriniň alikwotalary aýna aşagy gaplara ýerleşdirilip, sirke turşusy, propion turşusy, ýag turşusy we syçan fekal bilen inkubasiýa edildi. ekstraktlary 37°C-de 2 sagatlap, 5% CO2-de saklaň.
Ýogyn içege dokumasy PBS bilen gomogenleşdirildi we ýogyn içege dokumalaryndaky IL-6, TNF-α we IL-1β sitokinleriniň derejeleri luminex ELISA synag toplumlary (R&D ulgamlary, Minneapolis, MN, ABŞ) arkaly anyklandy. Şeýle hem, syçanlaryň esasy ýogyn içege epitelial öýjükleriniň syworotkasyndaky we medeniýet gurşawyndaky GLP-1 derejeleri öndürijiň görkezmelerine laýyklykda ELISA toplumy (Bioswamp, Wuhan, Hytaý) bilen kesgitlenildi.
Najasdan umumy DNK DNK ekstraksiýa toplumy (Tiangen, Hytaý) arkaly çykaryldy. DNK-nyň hili we mukdary degişlilikde 260 nm/280 nm we 260 nm/230 nm gatnaşykda ölçeldi. Soňra, her bir çykarylan DNK şablon hökmünde ulanylyp, dürli sebitlerde 16S rRNA geniniň V3-V4 sebitlerini güýçlendirmek üçin 338F (ACTCCTACGGGAGGCAGCAG) we 806R (GGACTACHVGGGTWTCTAAT) ýörite praýmerleri ulanyldy. PZR önümleri QIAquick Gel Extraction Kit (QIAGEN, Germaniýa) arkaly arassalandy, real wagt PZR arkaly mukdary kesgitlendi we IlluminaMiseq PE300 yzygiderlik platformasy (Illumina Inc., CA, ABŞ) arkaly yzygiderlikleşdirildi. Bioinformatika seljermesi üçin, öň habar berlen protokollara laýyklykda maglumatlary gaýtadan işlemek ýerine ýetirildi.21,22 Gysgaça aýdylanda, çig ekspres faýllaryny süzmek üçin Cutadapt (V1.9.1) ulanyň. OTU-lar UPARSE (7.0.1001 wersiýasy) ulanyp klasterleşdirildi we meňzeşlik kesimi 97% boldy we himer yzygiderliklerini aýyrmak üçin UCHIME ulanyldy. Jemgyýetiň düzüminiň seljermesi we klassifikasiýa SILVA ribosomal RNK gen maglumat bazasyna esaslanýan RDP klassifikatoryny (http://rdp.cme.msu.edu/) ulanyp geçirildi.
Gysga zynjyrly ýag kislotalarynyň (sirke kislotasy, propion kislotasy we ýag kislotasy) derejesi Tao we beýlekiler tarapyndan öň beýan edilişi ýaly, käbir üýtgetmeler bilen ölçeldi.23 Gysgaça aýdylanda, 100 mg nejas ilki 0,4 ml deionlaşdyrylan suwda suspenziýa edildi, soňra 0,1 ml 50% kükürt kislotasy we 0,5 ml 2-etilbutir kislotasy (içki standart) goşuldy, soňra gomogenleşdirildi we 4°C-de gyzdyryldy. 12,000 aýlan/minut tizlikde 15 minutlap C temperaturada santrifuga edildi. Üstki gatlak 0,5 ml efir bilen ekstraksiýa edildi we analiz üçin GC-e girizildi. Gaz hromatografiýasy (GH) analizi üçin nusgalar alaw ionizasiýa detektory (FID) bilen enjamlaşdyrylan GC-2010 Plus gaz hromatografy (Shimadzu, Inc.) arkaly analiz edildi. Bölünmek ZKAT-624 sütüniniň, 30 m × 0,53 mm × 0,3 μm (Lanzhou Zhongke Antai Analytical Technology Co., Ltd., Hytaý) arkaly amala aşyryldy. Maglumatlar GH çözüm programma üpjünçiligi (Shimadzu, Inc.) arkaly alyndy. Bölünme gatnaşygy 10:1, daşaýjy gaz azot we akym tizligi 6 ml/min boldy. Inýeksiýanyň göwrümi 1 μL boldy. Inýektoryň we detektoryň temperaturasy 300°C boldy. Peçiň temperaturasy 140°C-de 13,5 minut saklandy, soňra 250°C-e çenli ýokarlandyryldy. 120°C/min tizlikde; temperatura 5 minutlap saklandy.
Maglumatlar ortaça ± ortaçanyň standart ýalňyşlygy (SEM) hökmünde görkezilýär. Maglumatlaryň ähmiýeti bir taraply ANOVA we soňra Dankanyň köpugurly aralyk synagy arkaly bahalandyryldy. Ähli hasaplamalar üçin GraphPad Prism 5.0 programma üpjünçiligi (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, ABŞ) ulanyldy we p < 0.05 statistik taýdan ähmiýetli hasaplandy.
UC-niň güýçli garyn agyrylary, içgeçme we gan akma bilen geçýän dowamly gaýtalanýan kolit keselidigi mälim. Şonuň üçin, syçanlarda DSS sebäpli dowamly gaýtalanýan kolit BLG-niň kolite garşy netijeliligini bahalandyrmak üçin döredildi (1A surat). Gözegçilik topary bilen deňeşdirilende, DSS model toparyndaky syçanlaryň beden agramy ep-esli azaldy we DAI ýokary boldy we bu üýtgeşmeler BLG bejergisiniň 24 gününden soň ep-esli tersine öwrüldi (1B we C surat). Ýogyn içegäniň gysgalmagy UC-niň möhüm alamatydyr. 1D we E suratlarynda görkezilişi ýaly, DSS alan syçanlaryň ýogyn içegäniň uzynlygy ep-esli gysgaldy, ýöne BLG bejergisi bilen ýeňilleşdi. Soňra ýogyn içegäniň iltihaplanmagyny bahalandyrmak üçin gistopatologiki derňew geçirildi. H&E boýalan suratlar we patologiki ballar DSS-iň ulanylmagynyň ýogyn içegäniň gurluşyny ep-esli bozandygyny we kriptanyň ýok edilmegine getirýändigini, BLG bejergisiniň bolsa kriptanyň ýok edilmegini we patologiki ballary ep-esli azaldandygyny görkezdi (1F we G surat). Belli bir zat, BLG-niň 1 g/kg dozada gorag täsiri SASP-niň dozada täsirine deňeşdirilip bilnerdi. 200 mg/Kg. Bu netijeler umumylykda BLG-niň syçanlarda DSS sebäpli dowamly gaýtalanýan kolidiň agyrlygyny azaltmakda netijelidigini görkezýär.
TNF-α, IL-1β we IL-6 ýogyn içegäniň iltihabynyň möhüm iltihaplanma alamatlarydyr. 2A suratda görkezilişi ýaly, DSS gözegçilik topary bilen deňeşdirilende ýogyn içegäniň TNF-α, IL-1β we IL-6 genleriniň ekspressiýasynyň ep-esli ýokarlanmagyna sebäp boldy. BLG-niň ulanylmagy bu DSS arkaly üýtgeşmeleri ep-esli derejede yzyna gaýtaryp biler. Soňra, ýogyn içegäniň dokumasyndaky iltihaplanma sitokinleriniň TNF-α, IL-1β we IL-6 derejelerini kesgitlemek üçin ELISA ulandyk. Netijeler şeýle hem DSS bilen bejerilen syçanlarda ýogyn içegäniň TNF-α, IL-1β we IL-6 derejeleriniň ep-esli ýokarlanandygyny, BLG bejergisiniň bolsa bu ýokarlanmalary ýeňilleşdirendigini görkezdi (2B surat).
2-nji surat BLG DSS bilen bejerilen syçanlaryň ýogyn içegesinde TNF-α, IL-1β we IL-6 proiltihaply sitokinleriň gen ekspresiýasyny we öndürilişini basýar.(A) TNF-α, IL-1β we IL-6-nyň ýogyn içege gen ekspresiýasy; (B) TNF-α, IL-1β we IL-6-nyň ýogyn içege belogynyň derejeleri. Maglumatlar ortaça ± SEM (n = 4–6) hökmünde görkezilýär.#p < 0.05 ýa-da ##p < 0.01 ýa-da ###p < 0.001 gözegçilik (Con) toparyna garşy; *p < 0.05 ýa-da **p < 0.01 DSS toparyna garşy.
Içege disbiozy UC-niň patogenezinde möhüm ähmiýete eýedir.24 DSS bilen bejerilen syçanlaryň içege mikrobiotasyny modulirleýändigini ýa-da modulirlemeýändigini öwrenmek üçin, içegeleriň içindäki bakteriýa jemgyýetini seljermek üçin 16S rRNA yzygiderligi geçirildi. Wenn diagrammasy üç toparyň 385 OTU-ny paýlaşýandygyny görkezýär. Şol bir wagtyň özünde, her toparyň özboluşly OTU-lary bardy (3A surat). Mundan başga-da, 3B we C suratlarynda görkezilen Chao1 indeksi we Şennon indeksi, BLG bilen bejerilen syçanlarda içege mikrobiotasynyň jemgyýet dürlüliginiň azalandygyny, sebäbi Şennon indeksi BLG bilen bejerilen toparda ep-esli azalandygyny görkezdi. Üç toparyň arasynda klasterleşdiriş nusgalaryny kesgitlemek üçin esasy komponent derňewi (PCA) we esasy koordinata derňewi (PCoA) ulanyldy we DSS bilen bejerilen syçanlaryň jemgyýet gurluşynyň BLG bejergisinden soň aýdyň bölünendigini görkezdi (3D we E surat). Bu maglumatlar BLG bejergisiniň DSS bilen baglanyşykly kolitli syçanlaryň jemgyýet gurluşyna ep-esli täsir edendigini görkezýär.
3-nji surat BLG DSS sebäpli kolitli syçanlarda içege mikrobiotasynyň dürlüligini üýtgedýär.(A) OTU-nyň Wenn diagrammasy, (B) Chao1 indeksi, (C) Şennonyň baýlyk indeksi, (D) OTU-nyň esasy komponent analiziniň (PCA) bal grafigi, (E) OTU esasy koordinat analiziniň (PCoA) bal grafigi. Maglumatlar ortaça ± SEM (n = 6) hökmünde görkezilýär.**p < 0.01 DSS toparyna garşy.
Içege mikrobiotasyndaky anyk üýtgeşmeleri bahalandyrmak üçin, biz ähli taksonomiki derejelerde içege mikrobiotasynyň düzümini seljerdik. 4A suratda görkezilişi ýaly, ähli toparlardaky esasy fila Firmicutes we Bacteroidetes, soňra Verrucomicrobia boldy. DSS bilen bejerilen syçanlaryň fekal mikrobial jemgyýetlerinde Firmicutes we Firmicutes/Bacteroidetes gatnaşygynyň deňeşdirilen mukdary gözegçilik syçanlary bilen deňeşdirilende ep-esli ýokarlandy we bu üýtgeşmeler BLG bejergisinden soň ep-esli tersine öwrüldi. Hususan-da, BLG bejergisi DSS bilen baglanyşykly kolitli syçanlaryň fekal mikrobial jemgyýetlerinde Verrucobacterium-yň deňeşdirilen mukdaryny ep-esli artdyrdy. Öý hojalygy derejesinde fekal mikrobial jemgyýetlerde Lachnospiriaceae, Muribaculaceae, Akkermansiaceae, Ruminococcaceae we Prevotellaceae bardy (4B surat). DSS topary bilen deňeşdirilende, BLG-niň azalmagy Akkermansiaceae-niň mukdaryny artdyrdy, ýöne Lachnospiraceae we Ruminococcaceae-niň mukdaryny azaldy. Esasan hem, urug derejesinde Iýmit mikrobiotasynda Lachnospira_NK4A136_group, Akkermansia we Prevotellaceae_UCG-001 bardy (4C surat). Bu netije şeýle hem BLG bejergisiniň DSS kynçylygyna jogap hökmünde mikrobiota deňagramlylygyny netijeli dikeltendigini görkezdi, bu bolsa Eubacterium_xylanophilum_group, Ruminococcaceae_UCG-014, Intestinimonas we Oscillibacter-iň azalmagy we Akkermansia we Prevotellaceae_UCG-001-iň köpelmegi bilen häsiýetlendirilýär.
4-nji surat BLG DSS bilen baglanyşykly kolit syçanlarynda içege mikrobiotasynyň mukdaryny üýtgedýär.(A) Filum derejesinde içege mikrobiotasynyň mukdary; (B) Maşgala derejesinde içege mikrobiotasynyň mukdary; (C) Jins derejesinde içege mikrobiotasynyň mukdary. Maglumatlar ortaça ± SEM (n = 6) hökmünde görkezilýär.#p < 0.05 ýa-da ###p < 0.001 gözegçilik (Con) toparyna garşy; *p < 0.05 ýa-da **p < 0.01 ýa-da ***p < 0.001 DSS toparyna garşy.
Gysga zynjyrly ýag kislotalarynyň (SCFA) Akkermansia we Prevotellaceae_UCG-001-iň esasy metabolitleridigini, asetat, propionat we butiratyň bolsa içegäniň boşlugynda iň köp duş gelýän SCFA-lardygyny göz öňünde tutup, 25-27-nji ýyllarda biz henizem gözlegimiziň dowamynda. 5-nji suratda görkezilişi ýaly, DSS bilen bejerilen toparda fekal asetat, propionat we butirat konsentrasiýalary ep-esli azaldy, BLG bilen bejerilen bolsa, bu azalmanyň öňüni köp derejede alyp bildi.
5-nji surat. BLG DSS sebäpli kolitli syçanlaryň najasynda SCFA-laryň derejesini ýokarlandyrýar.(A) Najasdaky sirke turşusynyň mukdary; (B) najasdaky propion turşusynyň mukdary; (C) najasdaky butir turşusynyň mukdary. Maglumatlar ortaça ± SEM (n = 6) hökmünde görkezilýär.#p < 0.05 ýa-da ##p < 0.01 gözegçilik (Con) toparyna garşy; *p < 0.05 ýa-da **p < 0.01 DSS toparyna garşy.
Biz şeýle hem jyns derejesindäki tapawutly SCFA we fekal mikrobiota arasyndaky Pearson korrelýasiýa koeffisiýentini hasapladyk. 6-njy suratda görkezilişi ýaly, Akkermansia propion turşusynyň (Pearson = 0.4866) we ýag turşusynyň (Pearson = 0.6192) öndürilmegi bilen oňyn baglanyşyklydy. Tersine, Enteromonas we Oscillobacter asetat öndürilmegi bilen negatiw baglanyşyklydy, Pearson koeffisiýentleri degişlilikde 0.4709 we 0.5104 boldy. Şeýle hem, Ruminococcaceae_UCG-014 propion turşusynyň (Pearson = 0.4508) we ýag turşusynyň (Pearson = 0.5842) öndürilmegi bilen negatiw baglanyşyklydy.
6-njy surat. Dürli SCFA-lar we ýogyn içegäniň mikroblary arasyndaky Pirson korrelýasiýa analizi.(A) Sirke turşusy bilen Enteromonas; (B) Sirke turşusy bilen sarsgyn taýajygy; (C) Akkermansiýa propion turşusyna garşy; (D) Propion turşusy bilen Ruminococcus_UCG-014; (E) Ýag turşusy bilen Akkermansiýa; (F)) Ýag turşusy bilen Ruminococcus _UCG-014.
Glýukagon ýaly peptid-1 (GLP-1) proglýukagonyň (Gcg) öýjük görnüşine mahsus post-translýasiýa önümidir we iltihaplanma garşy häsiýetlere eýedir.28 7-nji suratda görkezilişi ýaly, DSS Gcg mRNA ekspresiýasynyň ep-esli azalmagyna sebäp boldy. Ýogyn içege we BLG bejergisi DSS-iň Gcg azalmasyny gözegçilik topary bilen deňeşdirilende ep-esli yzyna gaýtaryp bilerdi (7A surat). Şol bir wagtyň özünde, DSS bilen bejerilen toparda gan serumyndaky GLP-1 derejesi ep-esli azaldy we BLG bejergisi bu azalmanyň öňüni ep-esli alyp bilerdi (7B surat). Gysga zynjyrly ýag kislotalary G-belok bilen baglanyşykly reseptor 43 (GRP43) we G-belok bilen baglanyşykly reseptor 41 (GRP41) aktiwleşdirilmegi arkaly GLP-1 sekresiýasyny höweslendirip bilýändigi üçin, biz kolit syçanlarynyň ýogyn içegäsinde GPR41 we GRP43-i hem barladyk we DSS synagyndan soň GRP43 we GPR41-iň ýogyn içege mRNA ekspresiýasynyň ep-esli azalandygyny we BLG bejergisiniň bu azalmalary netijeli halas edip biljekdigini anykladyk (7B surat). 7C we D).
7-nji surat BLG DSS bilen bejerilen syçanlarda syworotka GLP-1 derejesini we ýogyn içegäniň Gcg, GPR41 we GRP43 mRNA ekspresiýasyny ýokarlandyrýar.(A) Ýogyn içegäniň dokumasynda Gcg mRNA ekspresiýasy; (B) Syworotkadaky GLP-1 derejesi; (C) Ýogyn içegäniň dokumasynda GPR41 mRNA ekspresiýasy; (D) Ýogyn içegäniň dokumasynda GPR43 mRNA ekspresiýasy. Maglumatlar ortaça ± SEM (n = 5–6) hökmünde görkezilýär.#p < 0.05 ýa-da ##p < 0.01 gözegçilik (Con) toparyna garşy; *p < 0.05 DSS toparyna garşy.
BLG bejergisi DSS bilen bejerilen syçanlarda syworotka GLP-1 derejesini, ýogyn içegäniň Gcg mRNA ekspresiýasyny we fekal SCFA derejesini ýokarlandyryp bilýändigi sebäpli, biz asetat, propionat we butiraty, şeýle hem gözegçilik (F-Con), DSS kolitini (F-Con) -DSS) we BLG bilen bejerilen kolit (F-BLG) syçanlarynda GLP-1-iň ilkinji syçan ýogyn içegäniň epitelial öýjüklerinden çykarylmagy barada has giňişleýin öwrendik. 8A suratda görkezilişi ýaly, degişlilikde 2 mM sirke turşusy, propion turşusy we butir turşusy bilen bejerilen ilkinji syçan ýogyn içegäniň epitelial öýjükleri öňki barlaglara laýyklykda GLP-1-iň çykarylmagyny ep-esli derejede höweslendirdi.29,30 Şeýle hem, ähli F-Con, F-DSS we F-BLG (0,25 g fejele deň) GLP-1-iň ilkinji syçan ýogyn içegäniň epitelial öýjüklerinden çykarylmagyny ep-esli derejede höweslendirdi. Belli bir zat, F-DSS bilen bejerilen ilkinji syçan ýogyn içegäniň epitelial öýjükleri tarapyndan çykarylýan GLP-1-iň mukdary F-Con we F-BLG bilen bejerilen ilkinji syçanlara garanyňda has azdy. ýogyn içegäniň epitelial öýjükleri. (8B surat). Bu maglumatlar BLG bejergisiniň içegäniň SCFA-dan alynýan GLP-1 önümçiligini ep-esli derejede dikeltendigini görkezýär.
8-nji surat BLG-den alynýan SCFA syçanlaryň esasy içege epitelial öýjüklerinden GLP-1-iň bölünip çykmagyny höweslendirýär.(A) Sirke turşusy, propion turşusy we ýag turşusy syçanlaryň esasy içege epitelial öýjüklerinden GLP-1-iň bölünip çykmagyny höweslendirdi; (B) fekal ekstraktlar F-Con, F-DSS we F-BLG syçanlaryň esasy içege epitelial öýjüklerini höweslendirdi. Çykarylan GLP-1-iň mukdary. Ýogyn içege epitelial öýjükleriniň alikwotalary aýna düýbündäki Petri gaplaryna ýerleşdirildi we degişlilikde 2 mM sirke turşusy, propion turşusy, ýag turşusy we fekal ekstraktlar F-Con, F-DSS we F-BLG (0,25 g fekal deň) bilen işlendi. 37°C-da 2 sagat, degişlilikde 5% CO2. Syçanlaryň esasy ýogyn içegäniň epitelial öýjüklerinden bölünip çykýan GLP-1 mukdary ELISA arkaly anyklandy. Maglumatlar ortaça ± SEM (n = 3) hökmünde görkezilýär. #p < 0.05 ýa-da ##p < 0.01 boş ýa-da F-Con bilen deňeşdirilende; *p < 0.05 F-DSS bilen deňeşdirilende.
Gysgaltmalar: Ace, sirke turşusy; Pro, propion turşusy; ýöne, butir turşusy; F-Con, gözegçilik syçanlaryndan alynýan fekal ekstrakt; F-DSS, kolit syçanlaryndan alynýan fekal ekstrakt; F-BLG, BLG bilen bejerilen ýogyn içegeden alynýan fekal ekstraktlar.
Bütindünýä Saglygy Goraýyş Guramasy tarapyndan refrakter kesel hökmünde sanawa alnan UC global howpa öwrülýär; ýöne, keseli çaklamak, öňüni almak we bejermek üçin netijeli usullar henizem çäkli. Şonuň üçin, UC üçin täze howpsuz we netijeli bejeriş strategiýalaryny öwrenmek we işläp düzmek üçin gyssagly zerurlyk bar. Adaty hytaý lukmançylyk preparatlary geljegi uly wariantdyr, sebäbi köp sanly däp bolan hytaý lukmançylyk preparatlarynyň asyrlaryň dowamynda hytaý ilatynda UC-ni bejermekde netijelidigi subut edildi we olaryň hemmesi biologiki organiki we tebigy materiallar bolup, esasan adamlar we haýwanlar üçin zyýansyzdyr.31,32 Bu gözleg UC-ni bejermek üçin howpsuz we netijeli däp bolan hytaý lukmançylyk preparatyny gözlemek we onuň täsir mehanizmini öwrenmek maksady bilen geçirildi.BLG dümewi bejermek üçin ulanylýan meşhur hytaý ösümlik formulasydyr.8,33 Biziň laboratoriýamyzda we beýlekilerde geçirilen işler, BLG bilen bir çig maldan gaýtadan işlenen däp bolan hytaý lukmançylyk önümi bolan indigonyň adamlarda we haýwanlarda UC-ni bejermekde uly netijelilik görkezýändigini görkezdi.4,34 Şeýle-de bolsa, BLG-niň kolite garşy täsiri we onuň täsirleri Mehanizm belli däl. Häzirki gözlegde netijelerimiz BLG-niň DSS sebäpli ýogyn içege iltihabyny netijeli peseldýändigini görkezýär, bu bolsa içege modulýasiýasy bilen baglanyşyklydyr. mikrobiota we içegeden alynýan GLP-1 önümçiliginiň dikeldilmegi.
UC-niň agramyň ýitmegi, içgeçme, rektal gan akmasy we ýogyn içegäniň nemli bardasynyň giň zeperlenmegi ýaly tipik kliniki alamatlary bolan gaýtalanýan döwürler bilen häsiýetlendirilýändigi mälim.35 Şeýlelik bilen, dowamly gaýtalanýan kolit bäş günläp üç sikl 1,8% DSS bermek, soňra ýedi gün içmek arkaly berildi. 1B suratda görkezilişi ýaly, üýtgeýän agramyň ýitmegi we DAI ballary dowamly gaýtalanýan kolidiň üstünlikli başlanandygyny görkezýär. BLG bilen bejerilen topardaky syçanlarda 8-nji günden başlap, 24-nji günden düýpli tapawutlanýan ýokary sagalma görkezildi. Şol bir üýtgeşmeler DAI balynda hem syn edildi, bu bolsa kolidiň kliniki gowulaşmasynyň gowulanandygyny görkezýär. Ýogyn içegäniň zeperlenmegi we iltihaplanma ýagdaýy babatda, ýogyn içegäniň uzynlygy, ýogyn içegäniň dokumasynyň zeperlenmegi, şeýle hem ýogyn içegäniň dokumasyndaky TNF-α, IL-1β we IL-6 gen ekspresiýasy we iltihaplanma sitokinleriniň öndürilişi BLG bejergisinden soň ep-esli gowulaşdy. Umumylykda, bu netijeler BLG-niň syçanlarda dowamly gaýtalanýan koliti bejermekde netijelidigini aýdyň görkezýär.
BLG farmakologik täsirini nähili görkezýär? Öňki köp sanly barlaglar içege mikrobiotasynyň UC-iň patogenezinde esasy rol oýnaýandygyny görkezdi we mikrobiom esasly we mikrobiom maksatly terapiýalar UC-ni bejermek üçin örän özüne çekiji strategiýa hökmünde peýda boldy. Häzirki barlagda biz BLG bejergisiniň içege mikrobiotasynyň düzüminde uly üýtgeşmelere getirýändigini görkezdik, bu bolsa BLG-niň DSS sebäpli kolite garşy gorag täsiriniň içege mikrobiotasynyň modulýasiýasy bilen baglanyşyklydygyny görkezýär. Bu gözegçilik içege mikrobiotasynyň gomeostazyny täzeden programmalaşdyrmagyň TCM preparatlarynyň netijeliligini düşünmek üçin möhüm çemeleşmedigi baradaky pikir bilen gabat gelýär.36,37 Belläp geçmeli zat, Akkermansia içegeleriň nemli gatlagynda ýaşaýan, musinleri parçalaýan, propion turşusyny öndürýän, käse öýjükleriniň tapawutlanmagyny höweslendirýän we nemli bardanyň päsgelçilik bitewiliginiň funksiýasyny saklaýan Gram-negatiw we diňe anaerob bakteriýadyr.26 Köp sanly kliniki we haýwan maglumatlary Akkermansianyň sagdyn nemli barda bilen ýokary derejede baglanyşyklydygyny,38 we Akkermansia spp. agyz arkaly kabul edilmegini görkezýär. nemli bardanyň iltihabyny ep-esli gowulandyryp biler.39 Häzirki maglumatlarymyz Akkermansiýanyň deňeşdirme mukdarynyň BLG bejergisinden soň ep-esli artandygyny görkezýär. Mundan başga-da, Prevotellaceae_UCG-001 SCFA öndürýän bakteriýadyr.27 Köp sanly barlaglar Prevotellaceae_UCG-001-iň kolitli haýwanlaryň tezeginde pes deňeşdirme mukdarynda tapylandygyny görkezdi.40,41 Häzirki maglumatlarymyz şeýle hem BLG bejergisiniň DSS bilen bejerilen syçanlaryň ýogyn içegesinde Prevotellaceae_UCG-001-iň deňeşdirme mukdaryny ep-esli artdyryp biljekdigini görkezýär. Tersine, Oscillibacter mezofil, diňe anaerob bakteriýadyr.42 Oscillibacter-iň deňeşdirme mukdarynyň UC syçanlarynda ep-esli artandygyny we IL-6 we IL-1β derejeleri we patologiki ballar bilen ep-esli oňyn baglanyşyklydygyny habar berdi.43,44 Belli bir zat, BLG bejergisi DSS bilen bejerilen syçanlaryň tezeginde Oscillibacter-iň deňeşdirme mukdaryny ep-esli azaltdy. Belli bir zat, bu BLG üýtgedilen bakteriýalar iň köp SCFA öndürýän bakteriýalardy. Öňki köp sanly barlaglar SCFA-laryň ýogyn içegäniň iltihablanmagyna we içegäniň epitelial bitewüliginiň goralmagyna mümkin bolan peýdaly täsirlerini görkezdi.45,46 Häzirki maglumatlarymyz şeýle hem BLG bilen bejerilen syçanlarda DSS bilen bejerilen hapada SCFA asetatynyň, propionatyň we butiratyň konsentrasiýasynyň ep-esli ýokarlanandygyny görkezdi. Jemi alnanda, bu netijeler BLG bejergisiniň dowamly gaýtalanýan kolitli syçanlarda DSS bilen baglanyşykly SCFA öndürýän bakteriýalary netijeli güýçlendirip biljekdigini aýdyň görkezýär.
GLP-1 esasan ileumda we ýogyn içegäniň özünde öndürilýän inkretin bolup, aşgazan boşalmagyny gijikdirmekde we nahardan soň gan glýukozasyny peseltmekde möhüm rol oýnaýar.47 Subutnamalar dipeptidil peptidaza (DPP)-4, GLP-1 reseptor agonisti we GLP-1 nanomedisinasynyň syçanlarda içege iltihabyny netijeli ýeňilleşdirip biljekdigini görkezýär.48-51 Öňki barlaglarda habar berlişi ýaly, ýokary SCFA konsentrasiýalary adamlarda we syçanlarda plazma GLP-1 derejesi bilen baglanyşyklydy. 52 Häzirki maglumatlarymyz BLG bejergisinden soň, syworotka GLP-1 derejesiniň we Gcg mRNA ekspresiýasynyň ep-esli ýokarlanandygyny görkezýär. Şeýle hem, DSS bejergisi bilen bejergi alan kolit syçanlarynyň fekal ekstraktlary bilen stimulýasiýa garanyňda, ýogyn içegäniň medeniýetlerinde GLP-1 sekresiýasy ep-esli ýokarlandy. SCFA-lar GLP-1-iň bölünip çykmagyna nähili täsir edýär? Gwen Tolhurst we beýlekiler. SCFA-nyň GRP43 we GPR41 arkaly GLP-1 sekresiýasyny höweslendirip bilýändigini habar berdi.29 Häzirki maglumatlarymyz şeýle hem BLG bejergisiniň DSS bilen bejerilen syçanlaryň içegesinde GRP43 we GPR41 mRNA ekspresiýasyny ep-esli artdyrýandygyny görkezýär. Bu maglumatlar BLG bejergisiniň GRP43 we GPR41-i işjeňleşdirmek arkaly SCFA tarapyndan höweslendirilen GLP-1 önümçiligini dikeldip biljekdigini görkezýär.
BLG Hytaýda uzak möhletli reseptsiz (OTC) dermandyr. Kunming syçanlarynda BLG-niň iň ýokary kabul edilýän dozasy 80g/kg we ýiti toksiklik syn edilmedi.53 Häzirki wagtda adamlarda BLG-niň maslahat berilýän dozasy (şekersiz) günde 9-15 g (günde 3 gezek). Biziň gözlegimiz 1g/kg BLG-niň syçanlarda DSS sebäpli dowamly gaýtalanýan koliti gowşatdygyny görkezdi. Bu doza kliniki taýdan ulanylýan BLG dozasyna golaý. Biziň gözlegimiz şeýle hem onuň täsir mehanizminiň, azyndan bölekleýin, içege mikrobiotasyndaky üýtgeşmeler, hususan-da Akkermansia we Prevotellaceae_UCG-001 ýaly SCFA öndürýän bakteriýalar arkaly içegeden alynýan GLP-1 önümçiligini dikeltmek arkaly amala aşyrylýandygyny anyklady. Bu netijeler BLG-niň kliniki kolit bejergisi üçin mümkin bolan terapewtiki serişde hökmünde has köp seredilmäge mynasypdygyny görkezýär. Şeýle-de bolsa, onuň içege mikrobiotasyny modulirlemeginiň anyk mehanizmi mikrobiota ýetmezçiligi bolan syçanlarda we fekal bakteriýalaryň transplantasiýasynda tassyklanmaly.
Ace, sirke turşusy; ýöne, butir turşusy; BLG, pandan; DSS, dekstran natriý sulfaty; DAI, kesel işjeňliginiň indeksi; DPP, dipeptidil peptidaza; FID, alow ionizasiýa detektory; F-Con, gözegçilik Syçanlaryň fekal ekstraktlary; F-DSS, DSS kolit syçanlarynyň fekal ekstraktlary; F-BLG, BLG bilen bejerilen kolit syçanlarynyň fekal ekstraktlary; GLP-1, glýukagon ýaly peptid-1; Gcg, glýukagon; gaz hromatografiýasy, gaz hromatografiýasy; GRP43, G belok bilen baglanyşykly reseptor 43; GRP41, G belok bilen baglanyşykly reseptor 41; H&E, gematoksilin-eozin; HBSS, Hanks' Deňeşdirilen Duz Ergini; OTC, OTC; PCA, esasy komponentleriň derňewi; PCoA, esasy koordinat seljermesi; Pro, propion turşusy; SASP, sulfasalazin; SCFA, gysga zynjyrly ýag kislotalary; Hytaý lukmançylygy, däp bolan hytaý lukmançylygy; Ýaraly kolit, ýaraly kolit.
Ähli synag protokollary Pekin uniwersitetiniň Şençžen-Gonkong Ylym we Tehnologiýa Uniwersitetiniň lukmançylyk merkeziniň (Şençžen, Hytaý) Haýwanlar etikasy komiteti tarapyndan Institusional gollanmalara we Haýwanlar baradaky düzgünlere (etika belgisi A2020157) laýyklykda tassyklanyldy.
Ähli awtorlar konsepsiýa we dizaýn, maglumatlary toplamak ýa-da maglumatlary seljermek we düşündirmek işine uly goşant goşdular; makalanyň taslamasyny taýýarlamakda ýa-da möhüm intellektual mazmuny tankydy taýdan gözden geçirmekde gatnaşdylar; golýazmany häzirki žurnala tabşyrmaga razy boldular; ahyrsoňy neşir üçin wersiýasyny tassykladylar; Işiň ähli taraplary üçin jogapkär boldular.
Bu iş Hytaýyň Milli Tebigy Ylymlar Gaznasy (81560676 we 81660479), Şençžen uniwersitetiniň birinji derejeli taslamasy (86000000210), Şençžen Ylym we Tehnologiýa Innowasiýa Komitetiniň Gaznasy (JCYJ20210324093810026) we Guangdong welaýatynyň lukmançylyk ylymlary we tehnologiýa barlaglary gaznasy (A2020157 we A2020272), Guizhou lukmançylyk uniwersitetiniň dermanhanasy, Guizhou welaýatynyň Esasy Laboratoriýa tarapyndan maliýeleşdirildi (YWZJ2020-01) we Pekin uniwersitetiniň Şençžen hassahanasy (JCYJ2018009) tarapyndan goldanyldy.
1. Tang B, Zhu J, Zhang B we beýlekiler. Syçanlarda dekstran natriý sulfaty bilen döredilen eksperimental kolitde triptolidiň iltihaba garşy serişde hökmünde terapewtiki potensialy. pre-immune.2020;11:592084.doi: 10.3389/fimmu.2020.592084
2. Kaplan GG. IBD-niň global ýükü: 2015-nji ýyldan 2025-nji ýyla çenli. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2015; 12: 720–727. doi: 10.1038/nrgastro. 2015.150
3. Peng J, Zheng TT, Li Xue we beýlekiler. Ösümliklerden alynýan alkaloidler: içegeleriň çişme keselinde geljegi uly kesel modifikatorlary. Prefarmakologiýa. 2019; 10: 351. doi: 10.3389/fphar. 2019.00351
4. Sýao Haýteng, Peng Jie, Wen B we beýlekiler. Indigo Naturalis syçanlarda DSS sebäpli kolitde ýogyn içegäniň oksidatiw stresini we Th1/Th17 reaksiýalaryny basyp ýatyrýar. Oxid Med Cell Longev. 2019; 2019: 9480945. doi: 10.1155/2019/9480945
5. Çen M, Ding Y, Tong Z. Hytaý ösümlik dermany Sophora flavescens-iň (Sophora flavescens) ýaraly kolit bejergisinde netijeliligi we howpsuzlygy: kliniki subutnamalar we mümkin bolan mehanizmler. Prefarmakologiýa. 2020; 11:603476.doi:10.3389/fphar.2020.603476
6. Cao Fang, Liu Jie, Sha Benxing, Pan HF. Tebigy önümler: içegeleriň çişme keselini bejermek üçin tejribe taýdan netijeli dermanlar. Curr Pharmaceuticals. 2019; 25: 4893–4913. doi: 10.2174/1381612825666191216154224
7. Zhang C, Jiang M, Lu A. Ýaraly koliti däp bolan hytaý lukmançylygy bilen kömekçi bejergi barada oýlanmalar. Kliniki rew Allergiýa immunizasiýa. 2013; 44: 274–283.doi: 10.1007/s12016-012-8328-9
8. Li Zhongteng, Li Li, Chen TT we başg. Möwsümleýin grippi bejermekde Banlangen granulalarynyň netijeliligi we howpsuzlygy: randomizirlenen gözegçilikli synag üçin barlag protokoly.trial.2015;16:126.doi: 10.1186/s13063-015-0645-x